Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
酶类产品选购指南：
| 产品形式 | 产品货号 | 产品名称 | 产品来源 | 产品优点 | 应用场景 |
| 液体 开瓶即用 省时省力 | 40123ES | 胰酶溶液（无酚红，含EDTA） | 猪胰脏 | 经典配方价格友好适用性广 | 大部分连续的强贴壁细胞系 |
| 40124ES | 胰酶溶液（无酚红，无EDTA） | ||||
| 40126ES | 胰酶溶液（含酚红，无EDTA） | ||||
| 40127ES | 胰酶溶液（含酚红，含EDTA） | ||||
| 40134ES | PerfCell Tryzyme™ Express酶，含酚红 | 无动物来源 | 温和解离，保持细胞活性室温稳定，使用更方便 | 需要确保细胞表面蛋白完整性的原代细胞等要求 | |
| 40135ES | PerfCell Tryzyme™ Express酶，无酚红 | ||||
| 40514ES | 重组胰蛋白酶消化液，无酚红 | ||||
| 40506ES | ACCUTASE细胞消化液 | 胰酶替代物，温和解离，无需清洗和中和 | 绝大多数原代细胞、哺乳动物细胞系以及昆虫细胞，尤其适合干细胞、原代细胞及细胞表面标记、病毒生长分析、流式细胞分析以及生物反应器相关检测实验要求场景 | ||
| 粉末 配制灵活 稳定性高 | 40101ES | 胰蛋白酶 | 猪胰脏 | 价格友好，适用性广 | 常规细胞培养传代和初生组织解离 |
| 20416ES | 重组胰蛋白酶（质谱级） | 毕赤酵母 | 高纯度β-trypsin＞80%，α-trypsin＜20%高活性>6800 USP units/mg无外源性病毒污染无糜蛋白酶等杂酶污染蛋白质组学酶解漏切率比进口产品低50% | 大部分连续的强贴壁细胞系20416ES具有不自切的特性，尤其适用于蛋白质分析，如蛋白质质谱、测序、肽图谱分析 | |
| 40512ES | 重组胰蛋白酶（药典级） | 大肠杆菌 | 高纯度β-trypsin≥70%，α-trypsin≤20%活性>3800 USP units/mg无外源性病毒污染无糜蛋白酶等杂酶污染 | ||
| 40507ES | Collagenase I 胶原酶I型 | 溶组织梭菌 | 含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性） | 通常用于上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备 | |
| 40508ES | Collagenase II 胶原酶II型 | 含有更高的梭菌蛋白酶活性 | 通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备 | ||
| 40509ES | Collagenase III 胶原酶III型 | 含有更高的梭菌蛋白酶活性 | 常用于乳腺细胞和胎儿细胞的制备 | ||
| 40510ES | Collagenase IV胶原酶IV型 | 含有低胰酶活性 | 通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验，干细胞消化优先选择，比分散酶更温和，对细胞损伤更小，适用于有饲养层培养和无饲养层培养进行的团块传代 | ||
| 40511ES | Collagenase V胶原酶V型 | 含有更高的胶原酶活性和酪蛋白酶活性，更低的胰酶水平以降低对细胞膜蛋白的损伤 | 适用于胰腺小岛细胞和结缔组织细胞的分离 | ||
| 40104ES | Dispase II 分散酶II | 细菌 | 快速有效且温和，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性，无支原体或其他动物病毒污染 | 可用于多种类型组织、原代细胞和类器官的分离等 | |
| 40516ES | Elastase, Lyophilized 弹性蛋白酶 | 猪胰腺 | 能够水解天然弹性蛋白，不被胰蛋白酶、糜蛋白酶或胃蛋白酶攻击 | 常用于解离含有大量细胞间纤维网络的组织，尤其适合II型肺细胞分离 | |
| 60373ES | Papain from papaya Latex 木瓜蛋白酶 | 番木瓜乳液 | 高比活性（≥15 units/mg protein），快速分解蛋白质肽键特异性，水解多种蛋白质和肽类反应条件温和，中性或弱酸性环境即可发挥作用室温稳定，使用更方便 | 常用于原代或神经元细胞解离，例如产后小鼠皮质神经元、平滑肌细胞（对兴奋刺激的敏感性不受影响）等、修饰红细胞表面、从IgG和IgM中制备抗体Fab片段、完整膜蛋白酶的溶解、从纯化的蛋白多糖内生产糖蛋白 |
注：无酚红款胰酶溶液更适合：流式细胞术（避免酚红干扰荧光信号）；激素相关研究（如乳腺癌细胞、子宫内膜细胞等对雌激素敏感的实验）；无血清培养或特殊培养系统（酚红可能干扰钠-钾平衡或培养基成分）。
与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：
1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；
2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；
3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；
4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。
使用说明
1 母液及工作液配制
1）用50 mM HEPES-KOH缓冲液(pH 7.4, 150 mM NaCl)（60165ES）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。
2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。
【注】不推荐使用高于2.4 U/mL的工作浓度。
2 组织的解离
1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；
2）用无菌PBS清洗组织块；
3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。
4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。
5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。
6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；
7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。
3 细胞传代
1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5 min；
2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10 min；
3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15 min；
4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；
5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。
4.交感神经元的培养
1）将离体交感神经节去除结缔组织后，转移至不含Ca2+/Mg2+的1× HBSS(60148ES)中（HBSS溶液中需添加2 % (v/v) 饱和的NaHCO3(730324ES)、0.35 mg/L-半胱氨酸(54887ES)和20 U/mL木瓜蛋白酶(60373ES)，37℃孵育30min。
2）100 g离心，1 min后，在37℃下用含有4 mg/mL胶原酶II(40508ES)和1.25 mg/mL分散酶II(40104ES)的不含Ca2+/Mg2+的1×HBSS溶液(60148ES)继续消化30min。
3）100 g离心，10 min后，将细胞沉淀重悬至不含Ca2+/Mg2+的1×HBSS(60148ES)中。
4）100 g离心，10 min后，将细胞沉淀悬浮于含有2% B-27(60703ES)、1% L-谷氨酰胺(60701ES)、青霉素-链霉素（60162ES）的神经基础培养基(41410ES)中。
5）将细胞种于涂有10 μg/mL多聚-L-赖氨酸（60717ES）的12 mm盖玻圆片上，并在37°C，5% CO2中培养18-24h。
4.皮肤单细胞悬液制备
1）剪碎的皮肤组织在含有2 mg/mL胶原酶I(40507ES)、2.4 U/mL分散酶II(40104ES)和1 mg/mL DNase酶(10607ES)的RPMI1640培养基（41402ES）中于37°C消化90min。
2）消化后，用含0.5% BSA（36101ES）的HBSS缓冲液（60147ES）洗涤，并通过40 μm细胞过滤筛（84701ES）过滤后获得单细胞悬浮液。
冻干粉4℃保存，保质期2年。储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存。避免反复冻融。
